本帖最后由 墨凡 于 2018-10-14 21:38 编辑
十二卷组培过程简介
关于十二卷组培的争论看到好多，但是相关组培过程的介绍较少。搜集了一些资料简单科普一下，个人水平有限若有不当之处请多多指正，更详细的资料请查阅专业文献。 组培定义：组培即“植物组织培养”，利用植物组织（根、茎、叶等组织作为外植体）在无菌环境下进行离体培养的过程，是一种无性繁殖。更详细专业的解释可以自行百科！
组培目的及应用：一般是为了抢救濒危物种或者快速繁殖名贵植物。十二卷组培主要目的是为了快速繁殖名贵的品种实现品种普及。至于植物脱毒、培育新品种对组培技术提出更高要求。
组培过程
主要包括品种选择、外植体取材、外植体消毒、外植体接种、初代培养、增殖培养、壮苗生根培养、驯化（硬化）等过程。
1. 品种选择 一般选择名贵品种或者有特色的品种，意思就是选取这个品种是否有组的必要。
以美国大神Renny培育的两个品种为例说明： （1）特丸凸窗翠贝： 这款磨面寿就像Renny命名的一样，它的特点是丸窗、凸窗、短绒，毛面不像常见的磨面那么密集，也正是如此能够凸显它的通透性，呈现冰窗感觉。对笔者这种有轻微密集恐惧症的十二卷爱好者来说，若想尝试一下磨面养殖，选择这款感觉比较合适。
（2）珊瑚万象
珊瑚万象窗宽尺寸图： 珊瑚万象的特点：(1)株型: 叶片卡位比较好，正好卡在中间，短叶，利于养成球型；（2）窗宽：大窗2.8cm，Renny官网介绍窗宽能达2.8；（3）窗型：三角窗；（4）纹路：非放射线，非中间聚集，浓白曲纹。见多了欧系，白妙系这种细纹放射线纹路，反而觉得这种粗白曲纹更佳狂野。因此，珊瑚万象的优点在于株型好，大窗短叶，纹路有特色。实生打种应该是不错的选择。
2. 外植体取材
本文外植体主要指植物的器官，例如根、茎、叶、花、果等。需要注意的是无论选取哪部分器官（花药除外）所携带基因都是与母体一样的，但是不同器官的活性和增殖能力不一样。 取材尽量确保两点：一是确保器官健壮无伤疤，二是器官鲜活增殖能力好。 珊瑚万象长花剑了…… 对于十二卷植物来说主要选取植株的花剑或者叶子。花剑和叶子虽然两者携带的基因是一样的，但是花剑有以下优势：（1）取材方便，不伤母本；（2）花剑一般长势较快，3-5天就能长高，因暴露外界环境的时间较短而感染的微生物（例如，细菌、真菌等）较少，更容易处理。 因此，花剑更容易成功，即使组培失败也损失不大。
珊瑚万象花剑取材： 但有时花剑不容易获得，用叶子也是一样的，只是对组培技术人员的经验要求更高，因为用叶子消毒难度更大些。同样需要选取新鲜活性好的叶子，一般选取植株最中间的几片新叶比较好，不但活性好而且接触外界环境的时间短感染微生物少。当然大母本、或者亚成株最里面几片叶子若卸掉，整个植株也就废了。因此，用母本繁殖的小苗是最佳选择。
小苗开箱……
当苗子买来后，由于长途跋涉可能有些脱水，导致状态不佳，或者苗子较小中间叶片较少不容易成功，则需要养护一段时间。
当植物服盆或长了几片新叶后，感觉状态可以了，就可以下叶取材了。
新叶状态较好，比较新鲜且污染较少，因此一般砍头取中间最新鲜的叶子。
3. 外植体消毒
因为组织培养需要无菌环境，消毒目的就是为了清除外植体携带的杂菌，确保无菌环境。 消毒过程不仅会清除病菌，也会对外植体造成损伤，影响活性。消毒过度，可能造成外植体死亡，消毒不彻底又可能造成污染。因此这一步很关键，要求在清除病菌的同时最大限度的保证外植体的活性，需要操作者具有丰富的经验，能够根据外植体的状态权衡消毒方法和消毒时间。（具体步骤请自行百度）
珊瑚花剑消毒 花剑由于接触外界环境时间短，携带病菌少比较容易消毒，所需消毒时间较短对花剑损伤相对较小。因此花剑活性相对较高，容易成活。 2. 外植体接种
消毒完后，叶片放到培养基中，类似于叶片放到颗粒土上叶插一样。需要说明的是，一般叶片是整片放到培养基上（不是剁碎，又不是包饺子 ）。
而花剑需要切段后放置到培养基。
5. 初代培养
初代培养是指外植体接种后长出嫩芽或者愈伤组织的过程。 这是最关键的一步，直接关系到组培是否成功。细菌、真菌等污染主要发生在这个阶段，一般菌类污染主要集中在接种后3-14天左右。污染问题是影响成功与否的最主要的问题，其次才是褐变问题。 若一切顺利，一般1-3个月会形成嫩芽。
6. 增殖培养
增殖培养指初代培养长出的嫩芽、小苗转接到增殖培养基中进行增殖的过程。而继代培养一般指包含完整的脱分化和再分化过程。 十二卷利用花剑或者叶片进行增殖主要是以芽繁芽的增殖过程，属于试管微扦插。基本不涉及脱分化和再分化这个过程，因此十二卷这里一般不提继代培养。 是不是有些类似叶插苗的感觉……
花剑也冒芽了
珊瑚万象的嫩芽 将得到的嫩芽进行切割分离转接到增殖培养基中，一个嫩芽增殖出多个嫩芽，然后再切割分离进行多次增殖。这个过程就相当于外植体（叶片、花剑）繁殖出了几个芽（很少），然后由这几个芽继续增殖，一生十,十生百，百生千……成几何增长。
珊瑚万象增殖中……
7. 壮苗生根培养
生根培养是指继代培养增殖的苗转接到生根培养基中进行生根壮苗的过程。 经过诱导生根，提高苗的适应外界环境的能力。这是组培过程的最后一步，这步结束之后就可以出瓶了。
珊瑚万象生根培养中……
翠贝生根培养中……
8. 出瓶驯化
驯化过程是指出瓶苗出瓶后移植到土壤介质中在自然环境下生长的过程，也称硬化过程。
珊瑚万象出瓶苗
翠贝出瓶苗 新出瓶的组培苗去掉组培根后其实跟新下的头盖、叶插苗类似，需要适当消毒后散光通风处晾2周以上，甚至出现根点后再上盆更好。总之，耐心等待就行，不用太在意苗子干瘪。
下面出瓶苗晾20多天后出根点了
头盖晾20多天也出根点了…… 至于配土，最好保证基部接触的配土具有较好的亲根性（细粒蛭石等），铺面最好细粒的颗粒，下层土壤可以正常配土。 有花友经常遇到屁股发霉长毛，一般是由于晾的时间短就上盆浇水了。由于晾的时间短基部没有完全结痂愈合，容易感染霉菌，有的即使长根了也会长霉化水死亡。（这就类似人受伤一样，伤口没有充分结痂愈合前，不宜经常沾水。）因此，对于新手来说，无论组培苗还是新下的头盖叶插等，最好晾半个月以上。老司机有自己的套路请忽略……
参考文献： [1] 植物组培快繁技术 [2] http://sales.maughanii.com
声明 ID:Statement 1. 珊瑚万象和翠贝有些中间过程没有拍照记录，用其他类似图片代替。 2. 个人水平有限，若有不当之处，请多多指教。
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发表于 2018-10-14 19:02
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